病理技术HE染色在病理诊断中的应用研究

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  摘要:
  目的:分析HE染色技术在病理诊断中的应用,对其在诊断中的重要性进行探讨。方法:对1000例石蜡切片以及组织实施染色,对500例染色标本的细胞学进行观察,分析病理诊断中HE染色对准确性的影响,改进HE染色存在的不足。结果:HE染色质量在石蜡切片、以及脱落细胞学检查中都会受到影响。对技术进行改进能够对HE染色质量进行提高,从而使病理诊断率得到提升。结论:依据组织病理的不同选择不同的制片以及HE染色方法,提升了制片的质量,使病理诊断准确率获得提高,为临床治疗提供了准确资料。
  病理诊断是临床上最具说服力的诊断方法,它的准确性既和病理医师的技术水平有关,也同病理片的制作和染色有关[1]。但是目前病理诊断中出现了一些问题,对制片质量造成了影响,干扰了病理诊断准确性。本文对石蜡切片、以及脱落细胞学检查进行了分析,改进了病理组织的制片和HE染色等操作,临床效果较好。
  1、材料与方法
  1.1 一般资料 对我院2011年3月-11月制作的胃肠、胆、骨以及脂肪等1000例石蜡切片进行观察,并在规范操作下进行HE染色。对500例细胞学制片进行观察。需要延长脂肪组织的脱水固定时间,控制好骨组织的脱钙时间,否则会影响到HE染色效果,对病理诊断造成影响。
  1.2 方法 取材范围 器官或大块组织标本均从手术室获取;穿刺小标本和细胞学标本从内窥镜获取;为了确保组织病理的制片质量,要准确、迅速的进行取材。对病理组织进行制片时要依据组织的不同特点选择不同的固定和脱水时间,采用不同的染色方法,如缩短小标本的固定和脱水时间,延长脂肪组织的固定和脱水时间。新切片刀用于硬组织,旧切片刀用于软组织和破碎组织。要依据不同组织的特点选择不同的HE染色以及脱水和脱腊时间。染色过程中不同步骤需要的时间,会受到温度以及切片厚度等影响,要根据观察结果进行调整。不同染料的着色效果通常会因为生产厂以及批号的不同产生差异,在使用新产品时,首先要进行试染。要将配制好的染液和试液放置在有色试剂瓶内,试剂瓶的标签上要标注好名称、含量以及制作的年月日,在避光橱中顺序摆放好,根据情况可以放在冰箱中进行冷藏。如果临时使用需要进行配制,要选择恰当的配量。如果组织使用试剂会出现化学反应,要维持恒定的时间和温度,并且要做对照。如果染液具有的着色力出现明显减退时要进行更新,如果染色反应出现异常,要观察染液和试剂是否发生失效。染色过程中,要保持切片具有干燥性,避免对细胞形态造成影响。染色结束后,对染色结果要使用显微镜进行检查,观察是否符合标准,并对标本种类以及数量进行核对,从而确保制片的质量,为临床诊断提供准确资料。
  2、结果
  通过对组织的制片以及HE染色技术进行调整,全部标本都符合病理诊断的相应标准。如表1所示。
  表1 改进病理技术前后的染色诊断率
组别 胃肠、子宫、肝胆 胃镜活检 脂肪组织 子宫内膜
病理技术改进前
甲级片94.5% 甲级片92% 甲级片86% 甲级片80% 甲级片93%
病理技术改进后 甲级片99.8% 甲级片96% 甲级片91% 甲级片85% 甲级片97%
  3、讨论
  组织和细胞的HE染色质量会受到取材操作、固定操作以及脱水操作和切片的质量影响,而组织的染色质量对临床诊断具有直接影响,同时也对临床治疗造成影响[2]。因此针对标本的不同类型,要选择不同的取材方法,选取标本时要依据取材的不同范围、不同的取材方法以及不同的取材工具进行选择。同时取材工具的使用方法也要注意:要防止对组织进行挤压,从而导致组织结构发生变形。如果钳取组织非常困难,可以选择使用针吸,通常选取直径在2cm以上的脏器肿物。如覆盖在肺癌表面呈凝固状态的坏死物质,可以选择针吸进行取样,能够使标本的阳性率大大提升,进行深部取样时要选择离心后的沉渣[3-4]。要将骨组织脱钙以后再制作成切片,否则会对制作造成困难,并对细胞结构产生破坏,影响HE染色的效果,还会干扰到临床病理诊断的准确性[5]。只要组织需要进行检测,除了有具体的要求外,首先要将其进行固定。对组织进行固定是为了保持组织和细胞同活体时的成份以及形态相一致,避免出现组织溶解或发生细菌性腐败,导致原有构造出现破坏影响到诊断结果[6]。
  如果组织或细胞不能采取固定并且又不能及时检测时要将其保存在低温环境下。要根据不同标本的类型以及检查项目选择不同的固定剂及容器。一般情况下固定采用10%含量的福尔马林或95%含量的酒精,这是普遍使用的固定液。但要注意的是必须保证能够及时送检,从而避免组织由于固定时间太长而导致变脆以及变硬,对制片效果造成影响,并由此对诊断造成干扰,给患者的治疗造成困难。对组织进行固定时,要选择充足的固定液,要达到组织块总体积的5-10倍以上,并且取下组织后要及时将其放入合适的固定液中。通常的组织固定时间为3-24H,然后将组织在70%含量的酒精中进行保存。组织可以在室温25摄氏度的环境中固定,如处于低温环境时,组织的固定时间要进行延长。固定方法最普遍的是浸泡固定法。HE染色过程中针对不同浓度的试剂和不同温湿度的环境要各位注意,最终保证制片的质量,因为临床诊断的准确性和组织染色的质量有直接的关系,同时也会对患者的临床治疗造成影响,工作过程中,检测人员要严格依据相关的操作方法,保证客观准确的临床资料,确保准确的病理诊断。通过分析不同组织病理的特点,选择不同的固定操作、脱水操作以及制片和HE染色操作,提升了甲级制片率,并将其达到了96%以上,而使乙级片和丙级片出现下降,使其达到了20%,避免了丁级片的出现,使HE染色质量和制片的质量出现了很大的提升,患者的病理诊断准确率获得提高,并促使临床治愈率获得提升,保障了临床病理资料的客观准确。
  综上,HE染色诊断技术在病理诊断、临床诊断和治疗中是必不可少的重要环节,通过采用HE染色技术,可以提升病理诊断的准确性,提高临床诊断和治疗效果,值得进一步进行研究。
  参考文献:
  [1]王力。关于送检病理标本的几点建议[J].临床与实验病理学,2011,10(7):19-55.
  [2]鲁香凤。病理标本取材和填写病理申请单应注意的问题[J].中国实验诊断学,2009,3(3):137-138.
  [3]赵彤。病理新技术在肿瘤细胞病理学中应用[J].诊断病理学杂志,2010,3(28):211-294.
  [4]马正中。诊断细胞病理学[M].郑州:河南科学技术出版社,2009:7699-7700.
  [5]田玉旺,李琳。热处理在常HE染色发挥组织切片中应用[J].临床与实验病理学杂志,2009,4(10):365-412.
  [6]杨轩。家兔卵巢石蜡切片HE染色影响因素的研究[J].安徽农学通报,2009,18(01):254-255.
责任编辑: 巫哲
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